کلونینگ، بیان، خالص سازی و ارزیابی آنزیم لیزواستافین نوترکیب با استفاده از سیستم کلونینگ pbad

Authors

علیرضا مردادی

alireza mordadi msc student in medical microbiology, department of microbiology, faculty of medicine, hamedan university of medical sciences, hamedan, iranدانشجوی کارشناسی ارشد میکوب شناسی، گروه میکروب شناسی، دانشکده پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی همدان، همدان، ایران فهیمه حاجی احمدی

fahimeh haji ahmadi phd student in medical bacteriology, department of microbiology, faculty of medicine, hamedan university of medical sciences, hamedan, iranدانشجوی دکتری تخصصی باکتری شناسی، گروه میکروب شناسی، دانشکده پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی همدان، همدان، ایران سارا سلیمانی اصل

sara soleimani asl assistant professor, department of anatomy, faculty of medicine, hamedan university of medical sciences, hamedan, iranاستادیار، گروه آناتومی، دانشکده پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی همدان، همدان، ایران محمدرضا عربستانی

mohammd reza arabestani assistant professor, department of microbiology, faculty of medicine, hamedan university of medical sciences, hamedan, iranهمدان: دانشگاه علوم پزشکی همدان، دانشکده پزشکی، گروه میکروبشناسی پیوتر ژودا

abstract

سابقه و هدف: استافیلوکوک اورئوس یک پاتوژن مهم بیمارستانی بوده و باعث ایجاد بیماری هایی همچون اندوکاردیت، استئومیلیت، پنومونی، سندرم شوک سمّی و مسمومیت غذایی می گردد. امروزه استفاده بیش از حد و نامناسب از آنتی بیوتیک ها در درمان این بیماری ها باعث مقاومت این ارگانیسم به بسیاری از آنتی بیوتیک ها شده است. لیزواستافین به عنوان یک عامل موثر و اختصاصی در درمان عفونت های استافیلوکوکی محسوب می شود. هدف از این مطالعه تولید لیزواستافین نوترکیب با استفاده از سیستم کلونینگ pbad می باشد. مواد و روش ها: در مرحله اوّل، ساخت پلاسمید نوترکیب pbad با استفاده از سیستم pbad/thio-topo تحت عنوان pbadlys انجام گرفت. سپس به منظور بیان ژن لیزواستافین از آزمون reverse transcriptase pcr استفاده گردید. در مرحله بعد، بیان لیزواستافین نوترکیب در سیستم pbad انجام شد که بیان پروتئین با ال-آرابینوز در غلظت نهایی 2/0 درصد القاﺀ گردید. سپس خالص سازی آنزیم با استفاده از ستون ni-nta agarose (qiagene, hilden, germany) انجام گرفت و در نهایت بررسی فعالیت آنزیمی با استفاده از محیط مولر هینتون آگار و ایجاد هاله عدم رشد مورد بررسی قرار گرفت. یافته ها: با توجه به نتایج حاصل شده از pcr و تعیین توالی، پلاسمید نوترکیبpbad با موفقیت ساخته شد. بیان پروتئین با استفاده از ال-آرابینوز در غلظت نهایی 2/0 درصد به خوبی القاﺀ و غلظت بسیار بالایی از آنزیم نوترکیب با استفاده از سیستم کروماتوگرافی ستونی نیکل حاصل گردید. لیزواستافین نوترکیب دارای فعالیت بسیار اختصاصی بر علیه استافیلوکوکوس اورئوس می باشد. استنتاج: آنزیم لیزواستافین نوترکیب حاصل شده با استفاده از سیستم بیانی pbad با توجه به میزان حاصل شده بسیار مقرون به صرفه از نظر هزینه می باشد و همچنین با عملکرد اختصاصی بر روی استافیلوکوکوس اورئوس بسیار موثر است.

Upgrade to premium to download articles

Sign up to access the full text

Already have an account?login

similar resources

کلونینگ، بیان، خالص سازی و ارزیابی آنزیم لیزواستافین نوترکیب با استفاده از سیستم کلونینگ pBAD

Background and purpose: Staphylococcus aureus is an important nosocomial pathogen which causes some diseases such as endocarditis, osteomyelitis, pneumonia, toxic shock syndrome, and food poisoning. The excessive and inappropriate use of antibiotics in the treatment of these diseases causes resistance to many antibiotics. Lysostaphin is an effective agent in the treatment of staphylococcal infe...

full text

کلونینگ ، بیان ژن، خالص سازی و تعیین خصوصیات آنزیم الاستاز حاصل از باکتری سودوموناس آئروجینوزا

سابقه و هدف: الاستاز حاصل از سودوموناس آئروجینوزا یک آنزیم مهم در زمینه مطالعات بنیادی بر روی Zn-متالوپروتئازها و نیز بعنوان فاکتور ویرولانس این باکتری مطرح است. در این مطالعه ژن مربوط به آنزیم الاستاز از سودوموناس آئروجینوزا (PAE) استخراج و کلون شده و پس از بیان و تخلیص، خصوصیات بیوشیمیایی آن شامل دما و pH بهینه و نیز فعالیت در حور حلالهای آلی گلیسرول، دی متیل فرمامید (DMF)، متانول، اتانول، ا...

full text

کلونینگ و تولید نوترکیب آنزیم گرانزیم M انسانی

Background and Objective: Granzyme M is a member of a granule serine proteases family, which is mainly expressed by cytotoxic T lymphocytes and natural killer cells. Granzyme M appears to be a potent inducer of tumor cell apoptosis. With respect to the importance of Granzyme M in the apoptosis, the aim of this work was the production of the biologically active enzyme. Materials and Methods: ...

full text

کلونینگ و بیان ژن آنزیم ضد قارچ نوترکیب کیتیناز باسیلوس پومیلوس در باسیلوس سوبتیلیس 168

  سابقه و هدف: کیتین، پلی ساکارید خطی و یکی از فراوان‌ترین پلی ساکاریدهای طبیعی است که جزء اصلی ساختار دیواره سلولی بسیاری از موجودات است. کیتینازها، آنزیم‌های اصلی کاتالیز‌کننده کیتین به اجزاء مونومری و الیگومری‌ آن هستند و می‌توانند به عنوان یک عامل ضد قارچ طبیعی استفاده شوند. هدف از این تحقیق کلونینگ و بیان ژن نوترکیب کیتیناز در باکتری باسیلوس سوبتیلیس در درمان عفونت‌های قارچی و جای‌گزینی آن...

full text

کلونینگ و بیان اریتروپویتین نوترکیب انسانی در Leishmania tarentolae

زمینه و هدف : پروتئین اریتروپویتین انسانی هورمونی گلیکوزیله با وزن مولکولی 40 کیلو دالتون است که در کلیه سنتز شده و در تکثیر و تمایز اریتروسیت‌ها نقش دارد. این پروتئین دارویی با نام تجاری «اپویتین» شناخته شده و کاربرد موثری در درمان آنمی، سرطان و عفونت‌های ناشی از HIV ایفاء می‌کند. این مطالعه به منظور ارزیابی استفاده از میزبان انگلی لیشمانیا تارانتولا (Leishmania tarentolae) به منظور تولید فرم ...

full text

کلونینگ، بیان ژن، خالص سازی و تعیین خصوصیات آنزیم acc دآمیناز از باکتری سودوموناس فلورسنس

گروهی از باکتری های همزیست با گیاهان، تحت عنوان pgpr (باکتری های محرک رشد گیاهان) آنزیمی به نام acc دآمیناز (ec4.1.99.4) را کد می کنند که این آنزیم، تنظیم کننده ی تولید اتیلن از طریق متابولیزه نمودن acc (حد واسط بیوسنتز اتیلن) و شکستن آن به آمونیاک و α-کتوبوتیرات می باشد. این آنزیم نقش مهمی در تسهیل رشد گیاهان از طریق کاهش میزان اتیلن بخصوص در شرایط سخت محیطی دارد. بنابراین هدف این مطالعه، بیان...

full text

My Resources

Save resource for easier access later


Journal title:
مجله دانشگاه علوم پزشکی مازندران

جلد ۲۵، شماره ۱۲۸، صفحات ۱۸-۲۸

Hosted on Doprax cloud platform doprax.com

copyright © 2015-2023